共创共赢
二甲基黄和二乙基黄，属于工业染剂，主要用于石蜡、塑胶、印刷油墨、石油和肥皂等的着色，具有致癌性。因其不属于食品添加剂范畴，从未列入中国台湾监控部门的常规检查项目，被当地不法商人利用至今。目前，关于该类物质的测定方法几乎没有报道。
迪马科技建立固相萃取-超液相色谱串联质谱法同时检测腐乳中二甲基黄和二乙基黄，本方案具有
以乙腈为提取液，采用ProElut DYC固相萃取柱净化样品，通过UPLC- MS/MS检测；
前处理步骤简单、净化效果好、回收率高、基质效应小优点；
保证实验结果准确性、重现性。方法检出限0.03 μg/kg，定量限为0.1 μg/kg；
适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构等。
ProElut DMY 柱由2种吸附剂按照一定的比例分层填装而成，采用不同作用机理去除杂质，同时对二甲基黄和二乙基黄没有不可逆吸附，保证了样品的净化效果及回收率；本产品是商品化的成品柱，不用手工填装，吸附剂稳定性好，不受外界环境因素影响，保证实验结果的重现性和准确性；过柱过程操作步骤简单，节省时间，提高了工作效率
以下为详细解决方案，敬请参考！
腐乳中二甲基黄和二乙基黄的测定
1、适用范围
适用于腐乳中二甲基黄和二乙基黄的检测，二甲基黄的方法检出限是0.03 µg/kg，二乙基黄的方法检出限是0.04 µg/kg，定量限是0.1 µg/kg。
2、提取
取1.0 g样品，加1.0 g氯化钠与5 mL乙腈，涡旋混匀，6000 rpm下离心2 min，精密量取2.5 mL上清液待净化。
3、净化——ProElut DMY 3 mL（Cat#：65914）
a活 化： | 3 mL乙腈活化； |
b上 样： c淋 洗： | 加入待净化液，弃去流出液； 加入3 mL乙腈，弃去流出液； |
d洗 脱： | 加入4 mL10%氨水甲醇，收集流出液； |
d重新溶解： | 将流出液在50 ℃下氮吹至干，用乙腈定容至1 mL，过0.22 µm微孔滤膜，供LC-MS分析。 |
4、分析条件
4.1 UPLC 条件：
色谱柱：Endeavorsil C18，100 × 2.1 mm，1.8 μm (Cat.# 87003)
流 速：0.2 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：35 ℃
流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈
梯度设置
时间/Min. | 0 | 5 | 5.5 | 10 |
A（%） | 20 | 10 | 20 | 20 |
B（%） | 80 | 90 | 80 | 80 |
4.2 质谱条件：
电离模式：ESI | 扫描方式：正离子扫描 |
检测方式：多反应监测 | 电喷雾电压：5500 V |
雾化气压力：50 psi | 辅助气压力：50 psi |
气帘气压力：20 psi | 离子源温度：500 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称 | 定性离子对 | 定量离子对 | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/ V |
（m/z） | （m/z） | |||
(母离子/子离子) | (母离子/子离子) | |||
二甲基黄 | 226.2/77.0 | 226.2/77.0 | 28 | 77 |
226.2/134.1 | 28 | |||
二乙基黄 | 254.2/120.2 | 254.2/120.2 | 34 | 73 |
254.2/148.1 | 26 | |||
254.2/134.1 | 33 |
5、添加回收结果
腐乳中二甲基黄和二乙基黄的LC-MS检测添加回收结果
分析物 | 基质 | 添加水平(µg/kg) | 回收率(%) |
二甲基黄 | 黄色腐乳 | 1.0 | 95.4 |
二乙基黄 | 1.0 | 98.6 | |
二甲基黄 | 红色腐乳 | 1.0 | 90.5 |
二乙基黄 | 1.0 | 92.3 |
二甲基黄标准多反应监测色谱图
二乙基黄标准多反应监测色谱图
添加水平为1.0 µg/kg黄色腐乳中二甲基黄和二乙基黄检测的多反应监测色谱图
黄色腐乳中二甲基黄二二乙基黄检测(空白样品)的多反应监测色谱图
添加水平为1.0 µg/kg红色腐乳中二甲基黄和二乙基黄检测的多反应监测色谱图
红色腐乳中二甲基黄二二乙基黄检测(空白样品)的多反应监测色谱图
腐乳中二甲基黄和二乙基黄的测定相关产品信息：
货号 | 名称 | 规格 |
样品前处理 | ||
65914 | 用于腐乳中二甲基黄、二乙基黄检测 ProElut DMY | 3 mL, 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用连接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正压两用泵，无油 | 1/pk |
99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
30039 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
标准品 | ||
12-N-12774-100MG | 二甲基黄[60-11-7] | 100 mg |
50P-C12604600 | 二乙基黄[2481-94-9] | 100 mg |
色谱柱及保护柱 | ||
87003 | 超液相色谱柱 Endeavosil C18 | 100 × 2.1 mm，1.8 μm |
HPLC溶剂?缓冲盐?离子对试剂 | ||
50101 | 乙腈 HPLC级 | 4 L |
50102 | 甲醇 HPLC级 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC级 | 50 mL |
通用色谱产品 | ||
52401B | 瓶架/蓝色（现货） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（现货） | 50孔 |
1034 | 样品瓶（棕色/螺纹） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 样品瓶盖/含垫（已经组装） | 100/pk |
H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035*
