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鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法解决方案
参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法》
目前有关妥布霉素检测的文献和标准较少，主要参考标准《GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法》；液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)具有高灵敏度和高特异性，适用于基质复杂、样品组分含量很低的兽药残留的确证分析。
方法优势
迪马科技开发的《鱼肉中妥布霉素的检测》：
鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方案适用于鱼肉中妥布霉素检测。本方法定量限是20.0 μg/kg。
2、 标准品配制
(1) 单标储备液1000 μg/mL，准确称取妥布霉素，用水配制成1000 μg/mL的储备液。
(2) 中间液10.0 μg/mL，吸取适量单标储备液1000 μg/mL，用水配制成10 μg/mL的中间液。
3、提取
(1) 称取样品（鱼肉）5.0 g（至0.05 g），置于50mL离心管中。加入20 mL三氯乙酸水（25 g/L）和2 mL二氯甲烷，涡旋分散，振荡5 min，8000 r/min离心2min，收集上清液；
(2) 在上清液中加入5 mL乙腈混匀，8000 r/min离心2 min，待净化（离心为了去除乙腈水溶解时产生的气泡）。
4、净化—— ProElut PXC 60 mg/3 mL（Cat.# 68203）
(1)活化： | 依次加入3 mL甲醇，3 mL水，流出液弃去； |
(2)上样： | 将上样液加入柱中，流出液弃去； |
(3)淋洗： (4)洗脱： | 依次用5 mL水、3 mL甲醇淋洗，流出液弃去； 3 mL 20%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液； |
(5)定容： | 将洗脱液在40 ℃水浴下通入氮气吹至0.2 mL，然后用流动相重新定容至0.5 mL，上机分析。 |
同方法制备基质匹配标准溶液。
5、色谱条件
UPLC 条件：
色谱柱：Platisil CN，150 x 4.6 mm，5 μm (Cat.# 99506)
流 速：0.5 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：35 ℃
流动相： A：3%甲酸水 B：3%甲酸乙腈 A：B=9:1
质谱条件：
电离模式：ESI | 扫描方式：正离子扫描 |
检测方式：多反应监测 | 电喷雾电压：5500 V |
雾化气压力：60 psi | 辅助气压力：60 psi |
气帘气压力：20 psi | 离子源温度：550 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称 | 定性离子对 （m/z） (母离子/子离子) | 定量离子对 （m/z） (母离子/子离子) | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/V |
妥布霉素 | 468.2/163.1 | 468.4/163.2 | 35 | 70 |
468.4/144.8 | 25 | |||
468.4/205.3 | 30 | |||
468.2/324.1 | 20 |
6、添加回收结果
鱼肉中妥布霉素检测的添加回收结果(%)
| 回收率（%） | ||
添加浓度为20 μg/kg，加标量：10 μg/mL，加10 μL | |||
龙利鱼 | 鲫鱼 | 鳗鱼 | |
妥布霉素 | 89.2 | 95.3 | 93.7 |
|
妥布霉素标准品0.2 μg/mL的MRM色谱图
鱼肉中妥布霉素的测定——SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息
货号 | 名称 | 规格 |
样品前处理 | ||
68203 | ProElut PXC | 60 mg/3 mL 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
4803 | 1,3,6 mL柱管通用连接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正压两用泵，无油 | 1/pk |
99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米, 2 L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
30039 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm, 0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm, 0.45 μm 100/pk |
色谱柱及保护柱 | ||
99506 | Platisil CN色谱柱 | 150×4.6 mm，5 μm |
HPLC溶剂缓冲盐离子对试剂 | ||
50102 | 甲醇 HPLC级 | 4 L |
50101 | 乙腈 HPLC级 | 4 L |
50117 | 二氯甲烷 HPLC级 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC级 | 50 mL |
通用色谱产品 | ||
52401B | 瓶架/蓝色 | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色 | 50孔 |
1034 | 样品瓶（棕色/螺纹） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 样品瓶盖/含垫（已经组装） | 100/pk |
H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035*
