网站导航
产品分类点击展开+
PRODUCTS
诚信天下,质得信任

共创共赢

网站首页技术支持 ◇ 带你了解反相色谱柱的活化步骤和优化条件
带你了解反相色谱柱的活化步骤和优化条件
  • 发布日期:2022-07-26      信息来源:本站      浏览次数:172
    •    反相色谱柱具有硅胶和聚苯乙烯色谱柱二者的优点,并且摒弃了这两种色谱柱的缺点。以乙烯醇共聚物为基质的色谱柱,即使其载炭量很高也能保持表面的湿润。多孔结构具有足够大的平均孔径,对小分子化合物、多肽和小分子蛋白能够产生理想的分离效果。在有机溶剂比例较高的流动相中,该柱具有与硅胶基质色谱柱相同的柱效,但在碱性缓冲溶液为流动相条件下,其分离效率则超过硅胶色谱柱。显著的特点之一是基质被烷基化的填料的洗脱顺序,其保留能力与碳链长度成正比。

       
        反相色谱柱的活化步骤:
        1、应先使用20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱;
       
        2、若流动相含有缓冲盐,用跟流动相中盐相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡。用量为20倍柱体积,再用含缓冲盐的流动相平衡色谱柱,用量为20倍柱体积或以上;
       
        3、若流动相不含缓冲盐,用流动相平衡色谱柱,用量为20倍柱体积或以上;
       
        4、到压力基线平稳,若不平稳可延长平衡时间。
       

      反相色谱柱

       

        优化反相色谱柱的条件:
        在确定了色谱柱规格、合适的固定相柱填料、流动相溶剂和改性剂后,即可开始优化方法。方法的优化是根据目标决定的。如果要开发质量控制方法,您可能会需要像等度分离这种可变因素较少的方法。如果目标是得到较高分离度,节省分析时间并不是首要问题,可以选择长柱使所有组分都得到较大分离度。如果分离速度很重要,则应使用短柱和高流速。对于含许多保留不同的目标化合物的复杂样品,用等度分离可能不能解决问题,应开发并优化梯度方法。
       
        按约定俗成将水相溶剂和反相色谱中较弱的溶剂称为流动相“A”,“B”溶剂是有相组成较高和较强的溶剂。在反相色谱模式中,当增加B的百分比时,通常保留将减少。请注意,在还没有开发出样品的实际分析方法前,大部分人开发HPLC方法都是采用“反复实验”的方法,即,尝试各种不同流动相条件,以找出较佳条件。

    北京迪科马科技有限公司(迪马科技)

    北京迪科马科技有限公司(迪马科技)

    联系人:迪马科技  电话:021-61263957  邮箱:lu_haitang@dikma.com.cn  工厂地址:上海市徐汇区宜山路889号齐来大厦5幢703单元

    版权所有 © 2022 北京迪科马科技有限公司(迪马科技)  总流量:815973  备案号:京ICP备19012203号-1

    管理登陆  网站地图  技术支持:化工仪器网

    QQ在线客服
    电话咨询
    • 021-61263957