迪马液相色谱柱

在中国药典生物制品检测中的应用

——外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶

外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶（rhGM-CSF凝胶）系由重组大肠埃希菌表达、纯化后加入凝胶基质及辅料制成的外用制剂。2025年版《中国药典》三部收载该品种质量标准，涵盖生物学活性、鉴别、纯度、抑菌剂含量、装量及无菌检查等项目，其中纯度检查与抑菌剂含量测定属液相色谱控制的关键质量项目。

纯度检测采用体积排阻色谱（SEC）进行分子大小变异体分析，其难点在于：重组蛋白高级结构与活性密切关联，SEC需在温和生理条件下运行，对填料惰性与生物相容性要求 ji gao；凝胶基质中羧甲基纤维素钠、甘油、聚山梨酯80等辅料易产生非特异性吸附或共洗脱，干扰测定准确性；SEC柱装填工艺及孔径均一性决定理论塔板数，该指标系药典系统适用性的硬性要求。

抑菌剂检查针对该品种wei yi抑菌剂对羟基苯甲酸甲酯，药典规定采用反相液相色谱法。挑战在于：目标物含量低（约1μg/mL），属痕量检测，基质中高浓度辅料易产生干扰，对色谱柱选择性与分离度要求较高；对羟基苯甲酸甲酯极性较弱，其在C18柱上的保留行为与峰形对封端技术和硅胶纯度敏感，直接影响积分准确性与定量可靠性。

针对上述难点，迪马科技分别选用两款色谱柱进行方法重现：Dikma Protein SEC-400 5μm 300 x 8.0mm(Cat.#:99315)用于纯度分析，主峰理论塔板数约20390；Diamonsil^® C18(2) 5μm 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)用于抑菌剂检查，目标峰形对称，理论塔板数大于15000。结果表明，两款色谱柱均wan quan man zu 药典系统适用性要求，为国产色谱柱在该品种质量控制中的应用提供了实验依据。

按照2025版《中国药典》三部外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶项下方法，使用Dikma Protein SEC-400 5μm 300 x 8.0mm（Cat.#:99315）进行纯度分析，人粒细胞巨噬细胞刺激因子色谱峰理论塔板数在2万左右，能够满足分析要求。

取市售外用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶适量，加流动相稀释制成每1mL中含1mg的溶液作为供试品溶液。

色谱柱：Dikma Protein SEC-400 5μm 300x8.0mm（Cat.#:99315）

流动相：0.1mol/L磷酸盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液^*

流速：1mL/min

进样量：50μL

柱温：30℃

检测波长：280nm

仪器：岛津LC-2040C

^*注：取磷酸氢二钠10.3g、磷酸二氢钠3.36g与氯化钠2.92g，加水1000mL使溶解，调节pH值至7.0

按照2025版《中国药典》三部外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶的纯度分析方法，使用Dikma Protein SEC-400 5μm 300x8.0mm（Cat.#:99315）进行实验，人粒细胞巨噬细胞刺激因子色谱峰保留时间约34.5分钟，理论板数为20390，能够满足分析要求。

按照2025版《中国药典》三部外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶项下方法，使用Diamonsil^® C18(2) 5μm 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)进行对羟基苯甲酸甲酯的检查实验，对羟基苯甲酸甲酯色谱峰峰形对称，理论板数大于15000，能够满足分析要求。

对照品溶液：取对羟基苯甲酸甲酯对照品适量，加流动相溶解稀释成浓度为1μg/mL的溶液。

供试品溶液：取市售外用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含对羟基苯甲酸甲酯1μg的溶液。

色谱柱：Diamonsil^® C18(2) 5μm 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)

流动相：甲醇-1%冰醋酸（60∶40）

流速：1mL/min

进样量：20μL

柱温：30℃

检测波长：254nm

仪器：岛津LC-2040C

按照2025版《中国药典》三部外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶中对羟基苯甲酸甲酯的分析方法，使用Diamonsil^® 5μm C18(2), 250 x 4.6mm(Cat.#: 99603)进行实验，对羟基苯甲酸甲酯色谱峰保留时间约4.8分钟，理论板数大于15000，能够满足分析要求。