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蜂产品中双甲脒及其代谢物残留量的测定
参考GB 31657.8-2025 《食品安全国家标准 蜂产品中双甲脒及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》
双甲脒是一种常用于畜牧业和农业的广谱杀虫剂，通过干扰虫类神经递质的代谢达到防治病虫的效果，蜂产品中使用可以达到防治蜂螨的效果。双甲脒化学性质不稳定，在生物体内易代谢成具有致癌性的2,4-二 jia ji ben an，对人体健康造成威胁。GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药zui da 残留can liu 》规定牛、羊、猪及蜂蜜中的xian liang为0.4mg/kg, 并将双甲脒及其代谢产物 2,4-二 jia ji ben an的总和作为残留标志物。
GB 31657.8-2025 《食品安全国家标准 蜂产品中双甲脒及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》是由中华人民共和国nong ye nong cun 部 、guo jia 卫生健康委员会和国家市场jian du guan 理总局三大部委联合发布的重要技术标准。该标准已于2025年6月3日发布，并定于2025年9月1日起正式实施。本方法使用液相色谱串联质谱进行测定，具有更高的灵敏度和更低的检出限。
迪马科技参考GB 31657.8-2025重现了此方法，使用磷酸二氢钾缓冲液溶解样品，乙腈提取，使用我司色谱柱Leapsil® C18，100x4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)进行测定，基质匹配标准溶液进行计算，添加水平为5μg/kg的蜂蜜样品加标回收率可做到双甲脒51%-63%，2,4-二 jia ji ben an 80%-86%；添加水平为10μg/kg的蜂王浆样品加标回收率可做到双甲脒60%-72%，2,4-二 jia ji ben an 65%-73%。
经过大量实验测试，原方法重现性较差，且回收率偏低。我司对缓冲盐的使用进行了优化，使用弱碱性的磷酸氢二钾缓冲液代替磷酸二氢钾后，减弱了前处理过程中双甲脒的代谢速率，降低了由于大量代谢中间产物反应不che di造成的回收率损失，有利于实验结果的重现，更容易达到标准中批内样品相对标准偏差≤20%的要求。使用0.2mol/L磷酸氢二钾作为缓冲液后，回收率普遍提升了30%左右，大大降低了假阴性风险，增加了定量分析的准确性。
由于原方法做蜂王浆样品有强基质效应，我司增加了净化步骤，经过大量实验，使用我司ProElut® PMR 150mg/3mL(Cat.#: 65996)对样品提取液净化后，对目标物不产生吸附的同时，蜂王浆样品可由强基质效应降低为中等基质效应，减少了样品对离子源的污染并增加了仪器使用寿命，该净化方法简单、快捷，客户可根据实际需求选择使用。
本方案适用蜂蜜和蜂王浆双甲脒和2,4-二 jia ji ben an的测定。
(1) 双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准储备液：由迪马科技标准品部提供(Cat.#: 48872)，浓度为100μg/mL溶于乙腈。
(2) 双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准中间液Ⅰ：准确吸取适量双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准储备液，用50%乙腈水配制成标准中间液Ⅰ，浓度为5.0μg/mL。
(3) 双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准中间液Ⅱ：准确吸取适量双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准中间液Ⅰ，用50%乙腈水配制成标准中间液Ⅱ，浓度为125ng/mL。
(4) 双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准中间液Ⅲ：准确吸取适量双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准储备液，用50%乙腈水配制成标准中间液Ⅲ，浓度为1.0μg/mL。
(5) 双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准中间液Ⅳ：准确吸取适量双甲脒和2,4-二 jia ji ben an混合标准中间液Ⅲ，用50%乙腈水配制成标准中间液Ⅳ，浓度为25ng/mL。
蜂蜜：
(1) 称取5g样品于50mL塑料离心管中；
(2) 向离心管中加入5mL 0.2mol/L磷酸氢二钾溶液；
(3) 向离心管中加入5mL乙腈，振荡5min；
(4) 向离心管中加入5g氯化钠和5g无水硫酸镁，立即摇匀，振荡5min；
(5) 冷水浴5min；
(6) 8000rmp离心5min；
(7) 移取上清液至另一个离心管中待净化。
蜂王浆：
(1) 称取2g样品于50mL塑料离心管中；
(2) 向离心管中加入2mL 0.2mol/L磷酸氢二钾溶液；
(3) 向离心管中加入10mL乙腈，振荡5min；
(4) 向离心管中加入3g氯化钠和3g无水硫酸镁，立即摇匀，振荡5min；
(5) 冷水浴5min；
(6) 8000rmp离心5min；
(7) 移取上清液至另一个离心管中待净化。
ProElut® PMR 150mg/3mL (Cat.#: 65996)
样品：准确吸取2mL待净化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃进样瓶(Cat.#: 1033)，加入0.5mL水，混匀，经0.22μm PTFE滤膜过滤(Cat.#: 37178)，待测定。
基质匹配混合标准工作液： 准确吸取2mL空白样品待净化液于PMR小柱，接收流出液，吸取流出液0.5mL于2mL玻璃进样瓶(Cat.#: 1033)，加入适量标准中间液，用水定容至1mL，混匀，经0.22μm PTFE滤膜过滤(Cat.#: 37178)，待测定。
UPLC条件
色谱柱：Leapsil® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)
流速：0.3mL/min
进样量：10μL
柱温：35℃
流动相：A:0.1%甲酸水溶液 B:甲醇
质谱条件
电离模式: ESI
扫描方式: 正离子扫描
检测方式: 多反应监测
电喷雾电压: 4500V
雾化气压力: 50psi
辅助气压力: 50psi
气帘气压力: 20psi
离子源温度: 500℃
1. 液相条件为反向条件下，2,4-二 jia ji ben an 在普通C18色谱柱上保留很弱，在50%乙腈水的溶剂条件下，洗脱能力太强，容易有溶剂效应，经过测试，使用我司色谱柱Leapsil® C18，100 x 4.6mm，2.7μm (Cat.#: 86002)进行实验，对目标物有较好的保留，并且能消除溶剂效应。
2. 蜂王浆样品除了比蜂蜜样品有更强的基质影响，在进样过程中，还有更快的代谢速率。代谢速率测定实验结果显示，蜂王浆在等待进样过程中，每过1小时，就会产生2%的代谢物，蜂蜜产生0.5%的代谢物，建议自动进样器设置低温，降低双甲脒代谢速率。
3. 本方法在原方法基础上进行了优化，使用磷酸氢二钾替换了磷酸二氢钾，降低了代谢中间产物的不稳定性，提升了回收率，加标回收结果的重现性更好。
4. ProElut® PMR净化小柱对样品中的脂类有很强的选择性吸附，同时不吸附目标物。两种添加水平的蜂王浆样品的基质效应从24.8%、16.4%分别提升到55.6%、40.4%，除了降低基质效应的效果非常明显，上样后，小柱上也残留有色杂质，见下图：
下载方案