C8反相液相色谱柱在液相色谱中是应用zui广泛的技术，主要是因为它适用于分析极大多数的非极性物质和离子化合物。大多数用于反相色谱的固定相都是天然的疏水物质，因此，分析物是按照它们与固定相的疏水相互作用的大小来分离的。
C8反相液相色谱柱的应用，常利用各种流动相和添加物作用于反相色谱柱，添加物可以改变或修饰填料的表面，有时候还有可能会污染键合相表面；硅胶表面的疏水键合相是硅烷醇，残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中，这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待分析物反应成为基质成分。
1.C8反相液相色谱柱的平衡
C8反相液相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。一定确保分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，就会在处理问题方面获得zui大的”补偿”，而且C8反相液相色谱柱的寿命也会变得更长。
操作步骤：
a.平衡开始时将流速缓慢地提高，用反相液相色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）
b.如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水”过渡”即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
2.C8反相液相色谱柱的再生
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降（柱子的理论塔板数减低）。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
