极性改性反相色谱柱的日常维护
正确使用缓冲盐
缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过渡,使用后要冲洗。具体方法如下:
1. 等度条件:使用缓冲盐前需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗30min,
使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗
色谱柱过夜。
2. 梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗30min;分析完成后,再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱45min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
注意:过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相中不含缓冲盐。
3. 缓冲盐析出的补救方法:
1)方案1:用甲醇/水=20/80以1.0ml/min流速35℃条件下反向冲洗色谱柱120min;
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。