一、常规清洗(日常维护)
1. 流动相选择
- 高水相冲洗：优先使用含0.1%甲酸的水溶液，低比例有机相有助于溶解极性强的氨基酸残留。
- 流速控制：以0.2-0.3mL/min低速冲洗，避免高压损伤填料，逐步升至0.5-0.8mL/min。
2. 冲洗体积计算
- 按柱体积倍数冲洗。对于4.6×150mm色谱柱，需至少冲洗20倍柱体积。
二、深度清洁(针对性去除顽固污染物)
1. 有机溶剂梯度法
- 甲醇/水体系：依次用5%、20%、50%、100%甲醇梯度冲洗，每阶段保持10-15分钟。
- 乙腈/异丙醇组合：对脂溶性污染物，采用乙腈-异丙醇(1:1)混合液冲洗，可有效清除蛋白质碎片。
2. 酸碱交替处理
- 酸性清洗：0.1mol/L磷酸溶液，适用于溶解金属离子螯合物。
- 碱性清洗：氨水，可分解生物大分子。
3. 特殊污染物处理
- 硫醇类物质：添加β-巯基乙醇，可还原二硫键。
三、维护与储存规范
1. 保存溶剂选择
- 短期存放可用80%甲醇，长期存储推荐含0.1%叠氮化钠的乙腈-水。
2. 再生程序
- 每月执行一次完整再生流程，提高流速至2.0mL/min并维持30分钟。
3. 环境控制
- 储存温度保持在4-25℃，湿度低于60%，避免阳光直射。
四、验证与问题排查
1. 性能验证指标
- 基线波动<0.5mAU，理论塔板数恢复至初始值90%以上。
2. 异常情况处理
- 压力骤升：立即停泵，反向低压冲洗筛板。
- 保留时间漂移：重新校准流动相pH，检查缓冲液新鲜度。
