液相色谱柱是高效液相色谱(HPLC)系统的核心部件，其性能直接影响分离效果和实验结果的准确性。色谱柱价格昂贵且易受损伤，因此科学养护至关重要。以下是从使用前准备、流动相管理、样品处理到日常维护的全流程养护细节，旨在延长色谱柱寿命并保障数据可靠性。
一、使用前准备与安装
1. 检查柱状态
- 新柱或久存柱需用配套溶剂(如甲醇或乙腈)冲洗10-20倍柱体积，置换存储溶剂并排除气泡。
- 观察柱入口筛板是否清洁，避免固体颗粒堵塞。
2. 正确安装
- 确保柱方向与流动相流向一致(通常标记为“→”)。
- 使用专用接头，避免螺纹过度拧紧导致柱体变形。
二、流动相的管理
1. 溶剂纯度与过滤
- 流动相需采用HPLC级溶剂，水相需经0.45μm滤膜过滤并超声脱气。
- 缓冲盐应现配现用，避免微生物滋生或沉淀生成。
2. pH值控制
- 反相柱(如C18柱)流动相pH范围通常为2-8，pH(如强酸性或碱性)会溶解固定相硅胶基质。
- 正相柱(如硅胶柱)避免高水相比例，防止硅胶水解。
3. 梯度洗脱后处理
- 完成梯度洗脱后，需用初始溶剂(如甲醇-水)平衡15-30分钟，清除强保留组分。
- 若使用高比例有机溶剂(如纯乙腈)，结束后需切换至低浓度有机相过渡，防止固定相塌陷。
三、样品处理与进样规范
1. 样品前处理
- 样品需经0.22μm滤膜过滤或离心(10,000rpm以上)，去除颗粒物。
- 样品浓度适中，避免过载(通常单次进样量不超过柱容量的1%-5%)。
2. 进样方式优化
- 自动进样器需定期清洗进样针，避免交叉污染。
- 手动进样时避免气泡引入，进样速度均匀。
3. 避免强吸附样品
- 离子型或极性大分子易吸附在固定相表面，导致柱效下降。可通过添加离子对试剂(如TFA)或调整流动相极性改善。
四、操作条件控制
1. 流速与压力限制
- 严格遵守色谱柱额定流速(如C18柱通常为0.5-1.5mL/min)，超限会加速筛板损坏。
- 柱压突然升高可能由堵塞或颗粒物引起，需立即停机排查。
2. 温度稳定性
- 恒温控制(通常25-30℃)可减少流动相黏度波动，提升保留时间重现性。
- 避免柱温骤变，防止固定相结构破坏。
五、日常维护与存储
1. 冲洗与再生
- 每日使用后用低粘度溶剂(如甲醇或乙腈-水)冲洗30分钟，清除残留物质。
- 若柱效下降，可用异丙醇或四氢呋喃反向冲洗再生(需参考柱说明书)。
2. 长期存储
- 反相柱：存储于甲醇-水(如50:50)或纯甲醇中，避免纯水导致硅胶干燥开裂。
- 正相柱/HILIC柱：存储于正己烷或乙腈-水(含少量甲醇防霉)。
- 密封两端，存放于阴凉避光处(如冰箱)。
3. 记录与追踪
- 记录柱批次号、使用次数、样品类型及柱压变化，便于追溯性能衰减原因。
六、常见问题与应急处理
1. 柱效下降
- 可能原因：样品污染、固定相流失或筛板堵塞。
- 处理：反向冲洗、更换筛板或再生色谱柱。
2. 鬼峰与基线漂移
- 可能原因：流动相不纯或缓冲盐析出。
- 处理：更换新鲜溶剂并冲洗系统。
3. 柱压过高
- 可能原因：颗粒堵塞或柱床干涸。
- 处理：反向冲洗或拆卸检查筛板。
