免疫亲和柱是一种基于抗原-抗体特异性结合原理的高效分离和纯化工具，在生物样品分析、药物检测、食品安全等领域有着广泛的应用。
一、工作原理
核心是利用抗原与抗体之间的高度特异性结合反应。其基本组成包括固相载体和与之偶联的特异性抗体。当含有目标抗原的样品溶液通过柱时，目标抗原会与固定在固相载体上的抗体发生特异性结合，形成抗原-抗体复合物。而其他非特异性物质则会随着流动相流出柱子，从而实现对目标抗原的选择性富集和分离。
这种特异性结合具有高度的亲和力和专一性，即使在复杂的样品基质中，也能准确地捕获目标抗原。同时，还可以通过洗脱操作，将结合在抗体上的目标抗原洗脱下来，得到纯净的目标抗原用于后续的分析检测。
二、操作流程
（一）准备工作
选择合适的免疫亲和柱：根据目标抗原的性质和实验要求，选择相应规格和特异性的柱。确保柱的质量和性能符合实验需求。
样品预处理：对待检测的样品进行适当的预处理，以去除杂质和大颗粒物质，防止堵塞。同时，根据样品的性质和目标抗原的特点，可能需要对样品进行稀释或浓缩处理，以保证目标抗原的浓度在合适的范围内。
（二）上样
连接装置：将柱与液相色谱系统或蠕动泵等装置连接好，确保连接紧密，无泄漏。
平衡柱子：用适当的平衡缓冲液冲洗柱，以去除柱内可能存在的杂质和残留的溶剂，使柱子达到稳定的工作状态。平衡缓冲液的流速和冲洗体积应根据说明书进行操作。
上样操作：将预处理后的样品溶液缓慢注入柱中，控制上样流速，使样品能够均匀地通过柱子，与抗体充分接触。上样量应根据容量和目标抗原的浓度进行合理调整，避免过载导致分离效果下降。
（三）洗涤
洗涤缓冲液冲洗：上样完成后，用洗涤缓冲液冲洗免疫亲和柱，以去除未结合的非特异性物质。洗涤缓冲液的流速和冲洗体积应根据实验要求进行优化，一般采用较低的流速和适当的冲洗体积，以确保非特异性物质能够被充分洗脱，同时又不影响目标抗原与抗体的结合。
检测洗涤效果：可以通过检测洗涤流出液中的目标抗原含量来评估洗涤效果。
（四）洗脱
选择合适的洗脱液：根据目标抗原与抗体的结合特性，选择合适的洗脱液。洗脱液应能够破坏抗原-抗体之间的结合力，使目标抗原从抗体上解离下来。常用的洗脱液包括酸性缓冲液、有机溶剂等。
洗脱操作：将洗脱液缓慢注入亲和柱中，控制洗脱流速和洗脱体积。洗脱过程中，目标抗原会随着洗脱液流出柱子，收集洗脱液即可得到富集和纯化的目标抗原。洗脱流速一般较慢，以保证目标抗原能够充分洗脱下来，同时避免洗脱峰展宽。
（五）后续处理与分析
浓缩与保存：收集到的洗脱液可能含有少量的杂质和溶剂，需要进行适当的浓缩处理，以提高目标抗原的浓度。浓缩方法可以采用冷冻干燥、超滤等。浓缩后的目标抗原应妥善保存，避免其降解或失活。
分析检测：将富集和纯化的目标抗原用于后续的分析检测，以确定目标抗原的含量、结构和性质等信息。
