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极性改性反相色谱柱的基本原理和日常使用注意事项
  • 更新日期:2022-06-06     信息来源:本站      浏览次数:1464
    •    极性改性反相色谱柱是指利用非极性的反相介质为固定相,极性有机溶剂的水溶液为流动相,根据溶质极性的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。与HIC一样,RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,RPC固定相表面被非极性基团所覆盖,表现出强烈的疏水性。因此,需用极性有机溶剂或其水溶液进行溶质的洗脱分离。

       
        溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性,一般疏水性越大,分配系数越大。当固定相一定时,可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。RPC主要应用于相对分子质量低于5000,特别是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化,也可以用于蛋白质等生物大分子的分析和纯化。由于反相介质表面为强烈疏水性,并且流动相为低极性的有机溶剂,生物活性大分子在RPC分离过程中容易变性失活,所以,以回收生物活性蛋白质为目的时,应注意选用适宜的反相介质。
       
        反相介质的商品种类繁多,其中代表性的是以硅胶为载体,通过表面键合非极性分子层制备。通过控制反应时间和温度,可获得性能稳定的反相介质。在硅胶基质的反相填料中,以键合有C18、C8、C2的球形多孔填料较为常见,用途较广。
       
        RPC固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸性水溶液,添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相。
       
        极性改性反相色谱柱的日常使用注意事项:
        1、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中。
       
        2、氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
       
        3、若流动相是缓冲盐并且盐的浓度比较高分析完毕样品不要停泵,要立即冲洗色谱柱或者低流速平衡,以免色谱柱前段柱筛板堵塞。
       
        4、使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)。
       
        5、避免流动相组成及极性的剧烈变化。
       
        6、流动相使用前必须经脱气和过滤处理。

    北京迪科马科技有限公司(迪马科技)

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