免疫亲和柱基于抗原抗体反应,特异性抗体连接在柱体内,选择性吸附样品中的待检物,杂质不被吸附,流出柱外,柱上结合的目标物再被特定的洗脱液洗下来,可以用于液相色谱分析或者ELISA含量测定,是一种高效的前处理柱。
免疫亲和柱的特点:
1、采用单克隆免疫技术,可以有效性地将待测成分分离出来,分离效率和回收率高,正确性和可靠性强。
2、实验稳定性好,重复性强。
3、纯化过程简单快速,短时间即可处理大量样品。
4、实验设备轻便,自动化程度高,操作简单,对实验人员要求不高,可在小型试验场所使用。
5、无需有毒溶剂,实验过程安全可靠。
6、应用范围广,可处理多种复杂样品。
免疫亲和柱的条件优化要怎么做:
选择小柱:根据基质样品和目标物选择合适的SP小柱。
活化平衡:活化溶液可以湿润填料,渗透键合相,消除填料杂质,通常和洗脱液一致平衡溶液一般和上样液接近,从活化溶液过度到上样液,减少上样回收率损失。
上样:将提取溶液加入到小柱上,一般需控制流速在1-2滴/秒。
淋洗:使用与上样溶液相同或接近性质的溶液冲洗不需要的杂质。
洗脱:合适的洗脱溶剂将目标物洗脱下来。
小贴士:
真菌毒素危害极大,应戴手套操作。
不要使用过了有效日期的。
洗脱液可以直接使用色谱级甲醇洗脱,但可能会降低回收率。
多毒素检测中,呕吐毒素因为是水溶性,过柱操作时对有机溶剂耐受性低,所以组合中包含有呕吐毒素的前处理方法会相应复杂一些,前处理方法基本一致。