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C18色谱柱的两种pH环境选择方法
  • 更新日期:2022-02-14     信息来源:本站      浏览次数:1560
    •     C18色谱柱具备的孔径,改进的选择性、吞吐量、灵敏度及键合能力非常适合生物分子的分离分析。适合用于亲水性更强的蛋白质分离。

       
        C18色谱柱的pH环境选择:
        对于传统pH值使用范围通常为2~7,因为pH值高于8时C18固定相会受到限制。由于残余硅羟基的存在,易对碱性化合物造成不可逆吸附,造成峰拖尾,影响分离与分析。pH值太低则会使键合的烷基脱落,而且对成分的分离达不到要求。
        1、碱性条件下C18的选择
        制造快速分离碱性化合物的化学键合相一直是研究热点。
       
        双齿键合固定相的每个硅烷化分子中含有两个硅原子,两个硅原子之间以-O-或-CH2-CH2等基团连接,每个硅原子含有1个C18官能团。它的环状结构无论在低pH值条件下,还是高pH值条件下均显示了较高的稳定性和满意的柱效。
       
        与传统的单齿化学键合相相比,这种化学键合固定相突出的优点是在低、中、高pH值时都有很好的稳定性。
       
        在开发普鲁卡因有关物质的药物分析方法中,对比8种色谱柱,选择了耐受pH值范围较大的色谱柱。分析样品与杂质均为碱性,使用C18使各杂质与组分间分离较佳。若碱性物质间的分离效果不佳,可以考虑使用上述键合相填料。
       

       

        2、酸性条件下C18的选择
        为了改善色谱柱在低pH值时的稳定性,有人提出了空间位阻方法。
       
        空间位阻作用是指连接较大基团,立体阻碍溶质基团进攻硅醇基,使硅氧烷能够再生,提高了化学键合固定相抗水解的能力。
       
        还有人制备了侧链中含有异丙基或异丁基的C18化学键合固定相。该固定相由于引入了较大的侧链基团,立体阻碍了残留硅醇基与溶质之间的相互作用,在低pH值条件下能够保持稳定,这种化学键合固定相更适合酸性物质的分离。
       
        C18色谱柱就使用了空间位阻技术,其使用单官能团硅烷,具有较大的二异丁基侧链基团,空间位阻关键的硅氧烷键合到硅胶表面,以避免在低pH值条件下水解破坏,在酸性流动相条件下提供良好的稳定性和重现性。因此,StableBond色谱柱成为低pH值方法开发的优选。在方法开发初期,若选定流动相为酸性,可将此类色谱柱作为优选。

    北京迪科马科技有限公司(迪马科技)

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