分离原理：采用反相流动相体系，而按照正相顺序出峰。通过亲水性相互作用，可有效的分离反相色谱柱中因保留能力弱而难分离的强极性化合物。是一种分离机理，而具备这种分离机理的键合相种类非常多。在HILIC中，固定相是极性的，流动相中的水相部分表现为强洗脱溶剂，这与传统的反相色谱法*相反。

 

　　HILIC色谱柱的特点：

　　同时与阴、阳离子产生弱静电作用，对目标物具有不同选择性；

 

　　提供氢键、分子以及静电引力的多重作用；

 

　　能为强极性的目标物提供合适的保留；

 

　　采用水溶性有机相作为流动相，能够显著改善样品在流动相中的溶解度；

 

　　分离极性、亲水性的小分子目标物以及碱性药物分子。

 

　　HILIC色谱柱的作用机理：

　　可以被认为是反相液相色谱通过采用极性固定相来运行的。采用的流动相是含有少量水/缓冲盐或其他极性溶剂的高比例有机相。流动相中的水形成一个富水层被吸附在固定相表面，极性物质首先进入富水层得到保留。极性化合物是通过一个复杂的混合模式被保留的，包括：富水层和流动相之间的亲水分配、极性官能团和固定相间的氢键作用以及离子官能团的静电作用。当然，亲水分配是主要的保留模式。从保留机理来看，HILIC和反相色谱柱是有着非常大的差别的。