共创共赢
色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此可以说担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。能否找到合适的色谱柱,关系到整个分析工作的成败。目前市场上反相色谱柱有C18、C4、C8、C30、氰基柱、硅胶柱、氨基柱、苯基柱等。本文主要介绍C18柱。
C18色谱柱简称ODS柱(十八烷基键合硅胶填料)是一种长链烷基键合相有较高的碳含量和更好的疏水性,对各种类型的生物大分子有更强的适应能力。但因键合方式不同、粒径不同、长短不同,内径差异等方面因素,呈现出不同的选择性,分离效果也参差不齐。分析化学中可以根据pH环境、流动相极性、色谱柱的分类系统、药物极性等来选择合适的C18色谱柱。
选择C18色谱柱时应注意:
1)在pH值正常范围内(2~8)可选用现代高纯硅胶色谱柱,具有峰形好,重现性高和寿命长的特点,选用较短的柱子可以提高分离效率,选用较长的柱子可以增加保留,选用小颗粒度的填料可以提高分离度,对分子量大的组分宜选用大孔径填料的色谱柱。
2)分离极性大的组分(流动相水相过大)采用AQ类似的色谱柱。
3)分离生物碱类的化合物选用经过烷基化处理封口的填料可防止碱性化合物的拖尾现象。
4)酸性条件下(pH小于2)选用Zorbax Stable Bond C18类色谱柱或者宽pH值色谱柱。
5)低端碱性条件下(pH大于8)选用Zorbax Extend-C18、XBridge,XSelect,Atlantis,Symmetry,XTerra,SunFire等色谱柱。
6)选用含碳量高的柱子可以增加保留。