共创共赢
2020年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2019年相比,在茶叶的检验项目中,删除了除虫脲、多菌灵、甲氰菊酯、滴滴涕和特丁硫磷的检测,新增了内吸磷、乙酰甲胺磷、丙溴磷、毒死蜱和莠去津的检验项目。
迪马科技按照2020年版国抽细则的要求,参考《GB 23200.13-2016 食品安全国家标准 茶叶中448种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法》、《GB/T 23204-2008 茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》、《GB 23200.113-2018 食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》、《SN/T 4655-2016 出口食品中草甘膦及其代谢物残留量的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法》等相关标准,采用SPE、QuEChERS结合GC-MS、UPLC-MS/MS建立了一系列茶叶中农药残留的检测方法,系列方法中涵盖了所有2020版国抽细则中茶叶检验项目下的农药,可供广大分析工作者参考!
方法一 SPE-UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方法适用于茶叶中的克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、氧乐果、啶虫脒、吡蚜酮、吡虫啉和内吸磷(O+S)的检测。
2、标准品配制
(1) 单标储备液1.0 mg/mL: 准确称取适量各标准品,用乙腈配制成1.0 mg/mL的单标储备液;
(2) 混标储备液5.0 μg/mL: 分别吸取各单标储备液,用乙腈配制成5.0 μg/mL混标储备液;
(3) 混标中间液1.0 μg/mL: 吸取混标储备液,用乙腈配制成1.0 μg/mL混标储备液。
3、提取
(1) 取10.0 g样品,加入30 mL乙腈,振荡5 min,6000 rpm离心5 min,取出上清液;
(2) 向下层残渣中继续加入30 mL、20 mL乙腈,按照步骤(1)重复提取两次;
(3) 合并三次提取液,在40 ℃水浴中减压蒸至1 mL,加入乙腈复溶,并转移到具塞试管中定容至5 mL,取出1 mL,待净化。
4、净化—— ProElut TPC 12 mL (Cat.# 65354)
(1)活 化: | 加入10 mL乙腈-甲苯(3-1)活化,弃去流出液; |
(2)上 样: | 加入1 mL待净化液,收集流出液; |
(3)洗 脱: | 加入25 mL乙腈-甲苯(3-1),收集流出液,合并(2)和(3)流出液; |
(4)重新溶解: | 将流出液在40 ℃水浴中旋转浓缩至约0.5 mL,然后在室温下用氮气缓慢吹干,加1 mL甲醇溶解,上机分析。 |
注: 同方法制备基质匹配标准溶液
5、分析条件
UPLC 条件
色谱柱: Leapsil C18,100 x 2.1 mm,2.7 μm (Cat#: 86005)
流 速: 0.4 mL/min 进样量: 1 μL 柱 温: 35 ℃
流动相: A: 0.1%甲酸水 B: 乙腈
梯度设置
时间(Min) | 0 | 3 | 6 | 7 | 8 | 10 | 11 | 17 |
A(%) | 95 | 70 | 60 | 60 | 5 | 5 | 95 | 95 |
B(%) | 5 | 30 | 40 | 40 | 95 | 95 | 5 | 5 |
质谱条件
电离模式: ESI扫描方式: 正离子扫描
检测方式: 多反应监测电喷雾电压: 5500 V
雾化气压力: 50 psi辅助气压力: 50 psi
气帘气压力: 20 psi离子源温度: 500 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称 | 定性离子对 | 定量离子对 | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/V |
(m/z) | (m/z) | |||
(母离子/子离子) | (母离子/子离子) | |||
克百威 | 222.0/123.0 | 222.0/123.0 | 21 | 66 |
222.0/165.0 | 15 | |||
灭多威 | 163.0/88.0 | 163.0/88.0 | 8 | 30 |
163.0/106.0 | 15 | |||
3-羟基克百威 | 238.1/163.0 | 238.1/163.0 | 19 | 80 |
238.1/181.1 | 16 | |||
茚虫威 | 528.1/249.1 | 528.1/249.1 | 23 | 90 |
528.1/218.2 | 30 | |||
甲胺磷 | 142.1/94.0 | 142.1/94.0 | 17 | 65 |
142.1/124.9 | 17 | |||
142.1/112.0 | 17 | |||
氧乐果 | 214.4/155.0 | 214.4/155.0 | 20 | 56 |
214.4/141.2 | 19 | 74 | ||
啶虫脒 | 223.1/126.0 | 223.1/126.0 | 27 | 75 |
223.1/56.1 | 30 | |||
223.1/90.0 | 45 | |||
吡蚜酮 | 218.2/104.9 | 218.2/104.9 | 27 | 60 |
218.2/79.0 | 51 | |||
吡虫啉 | 256.1/209.0 | 256.1/209.0 | 21 | 65 |
256.1/127.0 | 21 | |||
内吸磷(O+S) | 259.2/89.1 | 259.2/89.1 | 12 | 45 |
259.2/61.0 | 40 |
6、添加回收结果
表1 绿茶中10种农药残留检测的添加回收结果(%)
目标物
| 添加水平10 μg/kg | 基质效应(%)基质标/溶剂标 |
加标量: 中间液混标1.0 μg/mL, 加100 μL | ||
克百威 | 108 | 88.5 |
灭多威 | 114 | 158 |
3-羟基克百威 | 106 | 83.1 |
茚虫威 | 120 | 101 |
甲胺磷 | 91.7 | 95.5 |
氧乐果 | 97.3 | 91.8 |
啶虫脒 | 112 | 139 |
吡蚜酮 | 92.8 | 81.6 |
吡虫啉 | 125 | 102 |
内吸磷(O+S) | 82 | 93 |
图1 10种农药标准品20.0 μg/L的MRM色谱图
图2 10种农药标准品20.0 μg/L的XIC色谱图
方法二 QuEChERS-UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方法适用于茶叶中的克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、乙酰甲胺磷、敌百虫、氧乐果、啶虫脒、吡虫啉和内吸磷(O+S)的检测。
2、标准品配制
(1) 单标储备液1.0 mg/mL: 准确称取适量各标准品,用乙腈配制成1.0 mg/mL的单标储备液;
(2) 混标储备液5.0 μg/mL: 分别吸取各单标储备液,用乙腈配制成5.0 μg/mL混标储备液;
(3) 混标中间液1.0 μg/mL: 吸取混标储备液,用乙腈配制成1.0 μg/mL混标储备液。
3、提取
(1) 取2.0 g样品,加入10 mL水混匀,浸泡30 min;
(2) 继续加入15 mL 乙腈,振荡5 min;
(3) 加入6 g 无水硫酸镁和1.5 g乙酸钠(Cat#: 64520S),振荡1 min,6000 rpm离心5 min;
(3) 取出8 mL上清液,待净化。
4、净化——ProElut QuE 15 mL Tube (Cat#: 64622)
将待净化液加入到15 mL ProElut QuEChERS净化管,涡旋混合1 min,6000 rpm离心5 min,准确取2 mL上清液于5 mL氮吹管中,40 ℃水浴中氮气吹至近干,加入1 mL甲醇,混匀,上机分析。
注: 同方法制备基质匹配标准溶液
5、分析条件
UPLC 条件
色谱柱: Leapsil C18,100 x 2.1 mm,2.7 μm (Cat#: 86005)
流 速: 0.4 mL/min 进样量: 1 μL 柱 温: 35 ℃
流动相: A: 0.1%甲酸水 B: 乙腈
梯度设置
时间(Min) | 0 | 3 | 6 | 7 | 8 | 10 | 11 | 17 |
A(%) | 95 | 70 | 60 | 60 | 5 | 5 | 95 | 95 |
B(%) | 5 | 30 | 40 | 40 | 95 | 95 | 5 | 5 |
质谱条件
电离模式: ESI扫描方式: 正离子扫描
检测方式: 多反应监测电喷雾电压: 5500 V
雾化气压力: 50 psi辅助气压力: 50 psi
气帘气压力: 20 psi离子源温度: 500 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称 | 定性离子对 | 定量离子对 | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/V |
(m/z) | (m/z) | |||
(母离子/子离子) | (母离子/子离子) | |||
克百威 | 222.0/123.0 | 222.0/123.0 | 21 | 66 |
222.0/165.0 | 15 | |||
灭多威 | 163.0/88.0 | 163.0/88.0 | 8 | 30 |
163.0/106.0 | 15 | |||
3-羟基克百威 | 238.1/163.0 | 238.1/163.0 | 19 | 80 |
238.1/181.1 | 16 | |||
茚虫威 | 528.1/249.1 | 528.1/249.1 | 23 | 90 |
528.1/218.2 | 30 | |||
甲胺磷 | 142.1/94.0 | 142.1/94.0 | 17 | 65 |
142.1/124.9 | 17 | |||
142.1/112.0 | 17 | |||
乙酰甲胺磷 | 184.0/143.0 | 184.0/95.0 | 10 | 60 |
184.0/95.0 | 29 | |||
敌百虫 | 256.9/109.0 | 256.9/109.0 | 22 | 80 |
256.9/127.0 | 20 | |||
氧乐果 | 214.4/155.0 | 214.4/155.0 | 20 | 56 |
214.4/141.2 | 19 | 74 | ||
啶虫脒 | 223.1/126.0 | 223.1/126.0 | 27 | 75 |
223.1/56.1 | 30 | |||
223.1/90.0 | 45 | |||
吡虫啉 | 256.1/209.0 | 256.1/209.0 | 21 | 65 |
256.1/127.0 | 21 | |||
内吸磷(O+S) | 259.2/89.1 | 259.2/89.1 | 12 | 45 |
259.2/61.0 | 40 |
6、添加回收结果
表1 绿茶中11种农药残留检测的添加回收结果(%)
目标物 | 添加水平50 μg/kg | 基质效应(%)基质标/溶剂标 |
加标量: 中间液混标1.0 μg/mL, 加100 μL | ||
克百威 | 89% | 96% |
灭多威 | 113% | 303% |
3-羟基克百威 | 82% | 94% |
茚虫威 | 70% | 102% |
甲胺磷 | 77% | 92% |
乙酰甲胺磷 | 83% | 134% |
敌百虫 | 83% | 83% |
氧乐果 | 91% | 96% |
啶虫脒 | 97% | 327% |
吡虫啉 | 105% | 77% |
内吸磷(O+S) | 78% | 112% |
图1 11种农药标准品13.3 μg/L的MRM色谱图
图2 11种农药标准品13.3 μg/L的XIC色谱图
方法三 SPE-GC-MS法
1、适用范围
本方法适用于茶叶中内吸磷(O+S)、灭线磷、甲拌磷、莠去津、氯唑磷、甲拌磷亚砜、甲拌磷砜、毒死蜱、三氯杀螨醇、水胺硫磷、丙溴磷、联苯菊酯、氯氰菊酯和高效氯氰菊酯、氰戊菊酯和S-氰戊菊酯的检测。
2、标准品配制
(1) 单标标准储备液: 准确称取各农药标准品于10 mL容量瓶中,用甲苯溶解,并定容至刻度;
(2) 混合标准储备液: 根据测定需要,吸取适量体积的单标标准储备液于50 mL容量瓶中,并用乙酸乙酯定容至刻度;
(3) 混合标准中间液1: 吸取5 mL混合标准储备液于10 mL容量瓶中,并用乙酸乙酯定容至刻度;
(4) 混合标准中间液2: 吸取1 mL混合标准储备液于10 mL容量瓶中,并用乙酸乙酯定容至刻度。
目标化合物 | 浓度(μg/mL) | ||
混合标准储备液 | 混合标准中间液1 | 混合标准中间液2 | |
内吸磷(O+S) | 20 | 10 | 2.0 |
灭线磷 | 15 | 7.5 | 1.5 |
甲拌磷 | 10 | 5 | 1.0 |
莠去津 | 50 | 25 | 5.0 |
氯唑磷 | 10 | 5 | 1.0 |
甲拌磷亚砜 | 10 | 5 | 1.0 |
甲拌磷砜 | 10 | 5 | 1.0 |
毒死蜱 | 50 | 25 | 5.0 |
三氯杀螨醇 | 10 | 5 | 1.0 |
水胺硫磷 | 50 | 25 | 5.0 |
丙溴磷 | 50 | 25 | 5.0 |
联苯菊酯 | 25 | 12.5 | 2.5 |
氯氰菊酯和高效氯氰菊酯 | 50 | 25 | 5.0 |
氰戊菊酯和S-氰戊菊酯 | 20 | 10 | 2.0 |
3、提取
(1) 取5.0 g样品于50 mL离心管中,加入15 mL乙腈,振荡5 min,8000 rpm离心5 min,收集上层清液;
(2) 向下层残渣中再加入15 mL乙腈,按步骤(1)重复提取一次,合并上清液;
(3) 将上清液在40 ℃水浴下减压蒸至约1 mL,加入6 mL乙腈-甲苯(3-1)溶解,待净化。
4、净化——ProElut TPC 12 mL (Cat#: 65354)
(1)活 化: | 加入10 mL乙腈-甲苯(3-1),弃去流出液; |
(2)上 样: | 将待净化液加入柱中,收集流出液; |
(3)洗 脱: | 加入25 mL乙腈-甲苯(3-1),合并(2)和(3)流出液; |
(4)重新溶解: | 将洗脱液在40 ℃水浴下减压蒸干,用乙酸乙酯定容至1 mL,混匀,供GC-MS分析。 |
注: 同方法制备基质匹配标准溶液。
5、GC-MS条件
色谱柱: DM-5MS, 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm (Cat.# 8231)
进样口温度: 240 ℃
升温程序: 初始温度70 ℃,保持2 min,以25 ℃/min升温至150 ℃,再以3 ℃/min升温至200 ℃,再以8 ℃/min升温至280 ℃,保持12 min
载气: 氦气,柱流速: 1.46 mL/min
进样方式: 不分流进样
进样量: 1.0 μL
离子源温度: 230 ℃
接口温度: 280 ℃
溶剂延迟: 6 min
电子轰击电离源(EI): 选择离子监测模式(SIM),分组监测见表1
表1 选择离子监测组表
通道 | 起始时间(min) | 结束时间(min) | 选择离子(m/z) |
1 | 9.70 | 11.20 | 158,200,242,88,115,171 |
2 | 11.60 | 13.90 | 260,121,231,88,114,170,200,215,173 |
3 | 14.50 | 15.50 | 161,257,285 |
4 | 17.90 | 20.00 | 125,153,97,314,258,286,139,141,250,136,121,230 |
5 | 23.00 | 25.00 | 339,374,297 |
6 | 28.00 | 30.00 | 181,166,165 |
7 | 32.00 | 43.87 | 181,152,180,167,225,419,125 |
6、添加回收结果
绿茶和红茶中多种农药残留量的GCMS检测添加回收结果
目标化合物 | 添加浓度(mg/kg) (加标量: 混合标准中间液1,加50 μL) | 回收率(%) | 添加浓度(mg/kg) (加标量: 混合标准中间液2,加50 μL) | 回收率(%) | ||
绿茶 | 红茶 | 绿茶 | 红茶 | |||
内吸磷(O+S) | 0.1 | 79.41 | 75.44 | 0.02 | 73.99 | 73.23 |
灭线磷 | 0.075 | 97.87 | 92.21 | 0.015 | 84.14 | 90.30 |
甲拌磷 | 0.05 | 93.09 | 77.50 | 0.01 | 87.64 | 75.28 |
莠去津 | 0.25 | 88.92 | 85.02 | 0.05 | 85.96 | 82.33 |
氯唑磷 | 0.05 | 98.33 | 91.77 | 0.01 | 87.96 | 87.74 |
甲拌磷亚砜 | 0.05 | 96.05 | 97.89 | 0.01 | 99.73 | 87.17 |
甲拌磷砜 | 0.05 | 99.10 | 93.79 | 0.01 | 86.00 | 84.28 |
毒死蜱 | 0.25 | 101.15 | 91.08 | 0.05 | 88.21 | 84.23 |
三氯杀螨醇 | 0.05 | 89.79 | 85.44 | 0.01 | 80.25 | 87.10 |
水胺硫磷 | 0.25 | 97.97 | 90.47 | 0.05 | 91.88 | 81.02 |
丙溴磷 | 0.25 | 95.46 | 85.85 | 0.05 | 83.23 | 77.98 |
联苯菊酯 | 0.125 | 102.37 | 93.98 | 0.025 | 94.47 | 86.04 |
氯氰菊酯 高效氯氰菊酯 | 0.25 | 98.21 | 91.93 | 0.05 | 94.17 | 89.73 |
氰戊菊酯 S-氰戊菊酯 | 0.1 | 109.83 | 105.98 | 0.02 | 119.19 | 102.30 |
14种农药残留标准(10 μg/mL)TIC图
方法四 SPE-UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测,定量限0.1 mg/kg。
2、标准品配制
单标标准储备液: 准确称取各标准品,用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。
混标标准中间液: 分别吸取各单标标准储备液,用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混标标准中间液。
3、提取
取1 g茶叶于50 mL离心管中,准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷,振荡10 min,超声10 min,8000 rpm离心5 min,取5 mL上清液,待净化。
4、净化——ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938)
(1)活 化: | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水,弃去流出液; |
(2)上 样: | 将待净化液加入柱中,弃去前3 mL流出液,收集后2 mL流出液,混匀,滤液过0.22 μm尼龙滤膜,上机分析。 |
注: 同方法制备基质匹配标准溶液。
5、UPLC-MS/MS条件
5.1 UPLC 条件
色谱柱: Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#: 99302)
流 速: 0.2 mL/min 进样量: 10 μL 柱 温: 35 ℃
流动相: A: 乙腈 B: 5 mM乙酸铵溶液,氨水调节至pH=11
梯度设置:
Time(min) | 0 | 2 | 2.1 | 8 | 8.1 | 15 |
A(%) | 80 | 80 | 20 | 20 | 80 | 80 |
B(%) | 20 | 20 | 80 | 80 | 20 | 20 |
5.2 质谱条件
电离模式: ESI | 扫描方式: 负离子扫描 |
检测方式: 多反应监测 | 电喷雾电压: -4500 V |
雾化气压力: 60 psi | 辅助气压力: 60 psi |
气帘气压力: 35 psi | 离子源温度: 550 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
目标化合物 | 定性离子对 (m/z) (母离子/子离子) | 定量离子对 (m/z) (母离子/子离子) | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/V |
氨甲基膦酸 | 109.9/62.8 | 109.9/62.8 | -23 | -53 |
109.9/78.9 | -35 | -51 | ||
草甘膦 | 167.8/62.8 | 167.8/62.8 | -30 | -50 |
167.8/81.0 | -21 | -31 |
6、添加回收结果
茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果
样品 基质 | 回收率(%) | |||||
添加水平: 0.1 mg/kg | 添加水平: 1 mg/kg | 添加水平: 5 mg/kg | ||||
加标量: 1.0 μg/mL,加100 μL | 加标量: 10 μg/mL,加100 μL | 加标量: 50 μg/mL,加100 μL | ||||
氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | |
绿茶 | 103 | 91 | 99 | 109 | 92 | 101 |
花茶 | 95 | 105 | 109 | 85 | 93 | 99 |
铁观音 | 84 | 81 | 83 | 94 | 80 | 100 |
红茶 | 100 | 101 | 86 | 85 | 89 | 98 |
普洱茶 | 80 | 95 | 89 | 95 | 88 | 102 |
R^2 = 0.9990
标准曲线浓度分别为: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL
R^2 = 0.9990
标准曲线浓度分别为: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL
茶叶中多种农药残留的检测相关产品信息:
货号 | 名称 | 规格 |
标准品 | ||
来电咨询 | 农药残留标准品 | 多种规格 |
样品前处理 | ||
65354 | 茶叶中农残检测萃取柱 ProElut TPC | 12 mL, 20/pk |
64520s | QuEChERS 萃取盐 6 g MgSO4,1.5 g NaOAc | 50/pk |
64622 | 15 mL 净化管, 400mg PSA / 400mg C18 / 200mg Carb / 1200mg MgSO4 | 50/pk |
65938 | 草甘膦检测固相萃取柱 ProElut GLY | 6 mL, 30/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
4803 | 1,3,6 mL柱管通用连接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正压两用泵,无油 | 1/pk |
99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
30039 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm, 0.22 μm 100/pk |
色谱柱及保护柱 | ||
86005 | UHPLC/HPLC兼容色谱柱 Leapsil C18 | 100 x 2.1 mm, 2.7 μm |
8231 | 气相毛细柱 DM-5MS | 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm |
99302 | Dikma Polyamino HILIC | 150 x 2.0 mm, 5 μm |
HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂 | ||
50101 | 乙腈 HPLC级 | 4 L |
50102 | 甲醇 HPLC级 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC级 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC级 | 50 mL |
通用色谱产品 | ||
52401B | 瓶架/蓝色(现货) | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色(现货) | 50孔 |
1034 | 样品瓶(棕色/螺纹) | 2 mL, 100/pk |
1035 | 样品瓶盖/含垫(已经组装) | 100/pk |
H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
红色产品货号#30039、#1034、#1035*……