通用型反相液相色谱柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;经常使用缓冲液固定相要降解。
通用型反相液相色谱柱在使用前,要进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
通用型反相液相色谱柱在使用缓冲液的过程中还要注意以下几点:
a.避免使用盐酸盐,盐酸盐对钢质有腐蚀作用;
b.缓冲液要现配现用,往往缓冲液是良好的菌类培养液,隔天或放置长时间实验时会发生很多怪现象;
c.使用缓冲液要及时掌握pH范围,做到胸中有数;
d.清洗液路和柱子时,有温控可加热到30摄氏度易于冲洗;
e.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出,若有白色盐类析出,定期用10%硝酸冲洗液路(拆下柱子,冲洗30mL10%硝酸溶液,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞;
f.选择缓冲液要用可靠的试剂,避免不纯的盐类造成不必要的麻烦;
过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,但是不含缓冲盐的溶液。