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草甘膦(Glyphosate,Gly)是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂,以其、廉价等特性被运用于各个农业和非农业领域。其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体,会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用,草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。目前常用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇(HFB)和三fu乙酸酐(TFAA)衍生后GC-MS检测,或9-芴基甲基三氯甲烷衍生后LC-MS/MS检测,这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题,因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。
迪马科技在参考各种标准及文献的基础上,建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法,采用水提取, ProElut GLY固相萃取柱净化样品,收集流出液,Polyamino HILIC色谱柱分离检测。方法定量限0.1mg/kg。该方法特点:1)前处理步骤少,提取液直接通过净化柱接收流出液即可;2)有机溶剂消耗量小,前处理过程中也无需使用酸碱试剂;3)仪器分析简单,样品无需衍生直接分析可提高结果稳定性及减少实验成本。本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测。可供广大分析工作者参考。
1、标准品配制
单标标准储备液:准确称取各标准品,用水配制成1000 ug/mL的单标标准储备液。
混标标准中间液:分别吸取各单标标准储备液,用水配制成1.0 ug/mL、10 ug/mL和50 ug/mL的混标标准中间液。
2、提取
取1 g茶叶于50 mL离心管中,准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷,振荡10 min,超声10 min,8000 rpm离心5 min,取5 mL上清液,待净化。
3、净化
ProElut GLY 6mL (Cat#:65938)
(1)活 化: | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水,弃去流出液; |
(2)上 样: | 将待净化液加入柱中,弃去前3 mL流出液,收集后2 mL流出液,混匀,滤液过0.22 um尼龙滤膜,上机分析。 |
注:同方法制备基质匹配标准溶液。
1 UPLC 条件:
色谱柱:Polyamino HILIC,150×2.0 mm,5 μm (Cat#:99302)
流 速:0.2 mL/min 进样量:10 μL 柱 温:35 ℃
流动相: A:乙腈 B:5 mM乙酸铵溶液,氨水调节至pH=11
梯度设置:
Time(min) | 0 | 2 | 2.1 | 8 | 8.1 | 15 |
A(%) | 80 | 80 | 20 | 20 | 80 | 80 |
B(%) | 20 | 20 | 80 | 80 | 20 | 20 |
2.质谱条件:
电离模式:ESI 扫描方式:负离子扫描
检测方式:多反应监测 电喷雾电压:-4500 V
雾化气压力:60 psi 辅助气压力:60 psi
气帘气压力:35 psi 离子源温度:550 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
目标化合物 | 定性离子对 (m/z) (母离子/子离子) | 定量离子对 (m/z) (母离子/子离子) | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/V |
氨甲基膦酸 | 109.9/62.8 | 109.9/62.8 | -23 | -53 |
109.9/78.9 | -35 | -51 | ||
草甘膦 | 167.8/62.8 | 167.8/62.8 | -30 | -50 |
167.8/81.0 | -21 | -31 |
添加回收结果
茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果:
样品 基质 | 回收率(%) | |||||
添加水平:0.1 mg/kg | 添加水平:1 mg/kg | 添加水平:5 mg/kg | ||||
加标量:1.0 μg/mL,加100 μL | 加标量:10 μg/mL,加100 μL | 加标量:50 μg/mL,加100 μL | ||||
氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | |
绿茶 | 103 | 91 | 99 | 109 | 92 | 101 |
花茶 | 95 | 105 | 109 | 85 | 93 | 99 |
铁观音 | 84 | 81 | 83 | 94 | 80 | 100 |
红茶 | 100 | 101 | 86 | 85 | 89 | 98 |
普洱茶 | 80 | 95 | 89 | 95 | 88 | 102 |