其一，在c8反相液相色谱柱上有很多填料，包括聚合物，聚合物表面涂上硅胶和氧化铝，无机－有机混合物，涂层氧化锆和石墨化碳都存在于这些键合硅胶上；
为增加c8反相液相色谱柱的应用，常利用各种流动相和添加物作用于反相色谱柱，添加物可以改变或修饰填料的表面，有时候还有可能会污染键合相表面；
硅胶表面的疏水键合相是硅烷醇，残留的硅烷醇存在于所有的硅胶键合填料中，这些硅烷醇具有弱酸性，因此能与某些待分析物反应成为基质成分。
其二，样品中含有的盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质。部分非常疏水的样品基质，如：玉米油，高芳香物质和蜡能粘住固定相装填表面并且改变其性质；
含有蛋白质物质的生物流体也能吸附在填料表面。有些物质有比待测物或少或大的保留值，那些保留值较小的物质如盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱，这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰，气泡，基线上移或者是负峰。如果样品成分在柱子中有很强的保留而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次上样后，这些吸附在柱子表面的物质通常就会积累在柱头。这些行为通常只有通过平行实验才能发现。有着中等保留值的样品能被缓慢洗出而且表现为宽峰，基线扰动，或者基线漂移。
